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 科研工作->混凝土教学会议版面格式 加入日期:2010-6-17 11:59:27 

 

2010

烟台学学报(自然科学与工程版)

 

2010

23

Sup.

Journal of Yantai University ( Natural Science and Engineering Edition )

Vol.23

 

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黄芪多糖对大西洋牙鲆的免疫影(二号黑体居中)

(空一行)

  英,王淑娴,叶海斌,盖春雷,李天保(四号楷体)

(山东省海水养殖研究所,山东省海水养殖病害防治重点实验室,山东 青岛  266002)  (小五号仿宋)

 

(小号宋体加粗变扁剂量(0.20.40.8mg 多糖/g 鱼体重)芪多糖溶隔日灌服 4 (500μL/),研究对西洋牙鲆免疫影响 15253555d 静脉采血 NBT  胞比例、疫球蛋白量、碱性酸酶、超化物歧化活性及补体 C3  含量NBT 阳性细服后第 35d   0.8 mg/g  鱼体重组例最高 24.7%AKPSOD 活性和免疫球白含量在服后 25d 0.8 mg/g  鱼体组水平最分别为 71.47U/L45.8U/mL49.4g/L灌服 25d0.4mg/g 鱼体重组 C3 含量 0.65g/L子与对照之间差异 (P<0.05)其峰值现与多糖用时间和服剂量之都存在相绩效关系 小五号楷,变扁) 关键五号宋体加粗,变扁)黄芪多糖大西洋牙,免疫系 小五号体,变扁)

 

黄芪(Astragalus membranaceus)名箭芪等为常用的中草药用价值广大分子化合物黄 芪多糖(Astragalus polysaccharides, APS)是从黄芪中提取出来一种生物性多糖,其主要活物质之化学免疫用已被研[1]。近国内外对物活性多作为免疫强剂的研较为深入各种多糖的免疫促进用已得到验证实[2~4]黄芪的作疗效也被究者和养者们重[5,6]。经过大的化学结药理分析,黄芪多糖的应用研究已经广泛开展,但试验对象大多为小鼠等哺乳动物,其在水产动物上的应用 研究还较少。为扩展黄芪多糖在水产养殖中的应用,发挥它对水产动物的免疫影响,本文确定黄芪多糖为研究对象西洋牙鲆(Paralichthys dentatus)为试初步研究芪多糖对西洋牙鲆疫功能的进作用,

以待开发更好的无害的新型药或免疫强剂 小五号宋体,变扁)

 

1    材料与方小四号宋体加粗,变扁)

1.1 小五号宋体加粗,变扁)

黄芪多糖取物含多糖 15%由亚药业提供无菌生理水配制成同浓度溶(0.4, 0.8, 1.6mg/mL)沸水浴 5min大西来自本所山实验基平均体重 100g饲料购自青岛金海公司的鱼颗粒饲料; 氏染(Wright  stain) 姆萨(Giemsa  stain) Amresco  ;氯硝基(Nirtp  Blue TetrazoliumNBT)来自 Chem Base  公司肝素上海蓝季技发展有公司物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)碱性酸酶(alkaline phosphatase, AKP)试剂购于南京成生物工研究所, C3 试剂

盒购于浙伊利康生技术有限司,其他剂均为化分析纯 小五号宋体,变扁)

1.2

大西洋牙于饲养于形玻璃钢(直径 65cm 65cm)每只桶内 12 定量投喂暂养 7d 用于 试验水温 19~25pH 7.8间歇(开 10min 5min每日排污换水 1/2室 内

1.3 试验设计

多糖接种式为灌服每隔 1d 灌服 1 (500μL),共 4 次;试验分 4 (空白对;第 123 组分别 0.20.40.8 mg/g) 3 个平,每个平行 4 条牙鲆;设重复试验。

1.4

灌服后第 15253555d 尾部静脉采(大西洋牙鲆重复使)一部分直接装入 EP 制备血室温 放置 1~2h4过夜, 5000r/min 离心 15min收集血清-20存备用部分用 1%素钠抗4保存 备用。

1.5 NBT 应用液的制备

NBT  菌生理盐配制成 2g/L  的水溶液温下搅拌 1h 使之完全过滤液要呈透的淡 黄色存于色瓶中前取 NBT  溶液与等 0.067mol/L 的磷酸盐缓pH 6.4混合 NBT


应用液。溶液现配用。

1.6 NBT 阳性细胞的测定

0.2mL 凝血和 0.2mL 2g/L  NBT  用液于试中混匀37温育 30min中间振摇移至温下 放置 15min混匀, 1 滴于上做成推,立即吹,先用 Wright 染液 30-60s再用 1.5  Giemsa 覆盖,轻摇动至混均匀,室静置 10min用蒸馏水洗。冲洗应将玻璃持平,置干燥,镜检测,胞被染成紫色或深色为 NBT  性细胞。录一个视 NBT  细胞百分

1.7 免疫球蛋白含量测定

100μL 血清加等量 12%PEG10000KD)溶 23振荡 2h 3000r/min 离心 15min,处理后血 清中蛋白减少量定为免疫球白总量,白含量采用 Bradford 斯亮蓝法定。

1.8 酶活性测定

SODAKP 活性均按南京建成剂盒方法SOD 按照 T-SOD 方法测定毫升反应 SOD 抑制率达 50%时所对应 SOD  量为一个 SOD  力单位(U)AKP 活性位定义为 100ml 37与基质 作用 15 min  产生 1mg   1 个金单位(1 金氏单位=7.14U/L)补体 C3 量同样按试剂盒方测定 g/L

1.9 数据处理

对所得数利用软件 SPSS 11.5  进行析,P<0.05 水平为显性差异。

 

2    结果

2.1    NBT 阳性细胞比例

1 为灌黄芪多糖大西洋牙血液中 NBT  阳性细胞量的变化 1 中可灌服 25d  各 试验组与照产生明差异(P <0.05)呈增强趋 35d  0.8mg APS/g 重组达最高阳性细胞 24.7%APS  对大西洋牙鲆的胞免疫存显著效应Duncana 各试验与对照组在显著性(P <0.05)

2.2    免疫球蛋白含量

黄芪多糖大西洋牙血清中免球蛋白含的影响如图 2 所示。灌后第 25d  试验组与照产著差异(P <0.05)尤以 0.8mg /g 组效最好达到 49.4g/L 3555d 各试验组较第 25d 都有所下降与对照差异显著(P >0.05)

 


多糖含 /g

 

0

0.2mg 

0.4mg 

0.8mg 

 

 

    

 

30                                                          c b

25

b                  b   b

20                                                                                                   c

 

15                        a                                                                     b

ab 

10                   a                      a                                              a

 

文本框: NBT阳性细胞百分数%5


75

 

文本框: 免疫球蛋白含量 g/L60

 

45

 

30

 

15                  a


b

 

 

 

a   ab


 

多糖含 / g 鱼体 

 

0

0 .2 mg 

0 .4 mg 

0 .8 mg 

 

 

 

 

    

 

 

 

 

a   b   b   b                                b   b a   a


 

0

15                  25                   35                   45                  55

取样  d


0

15                  25                  3 5                  4 5                 55

取样时   d


1 多糖 NBT 性细的影(小黑体)

Fig.1 Effect of APS on NBT cell (小五 TimesNew Roman

2.3    AKP


2 多糖免疫蛋白含量影响

多糖含 / g 鱼体

 

0

0.2mg

0.4mg

0.8mg

 

        

        

 

Fig.2 Effect of APS on total immunoglobulin contents


3 为灌服黄芪多糖大西洋牙血清中 AKP

活性变化 3 中可以灌服 APS 后第 15d 0.4

0.8mg /g AKP  明显增加与对照差性显 (P  <0.05) 25d 0.4mg /g 组最71.47U/L,较 对照组提 4 倍;后又呈下趋势。

2.4    SOD


14

 

文本框: AKP活性 金氏单位/100ml12                            b

 

10

8                         b

 

6

 

4

a  a

2


b

 

b          b

b b

ab b

ab 

a  a            a                                     a


黄芪多糖大西洋牙血清中 SOD  活性的影响 如图 4 。灌服后第 25d 各试验组都呈增强势, 0.8mg  /g   组差(P<0.05)

45.8U/mL对照提高 40.5% 55d  各组之间存 在显著差(P>0.05)

2.5    C3


0

5                 1 5               2 5               3 5               4 5                5 5

取样时 d

3  黄芪多糖对大西洋牙鲆血清中 AKP 性的影响

Fig.3    Effect of APS on AKP activities in the serum of

Paralichthys dentatus


5 为灌黄芪多糖大西洋牙血清中补体 C3 含量的变化从图 5 服后 25d C3 含 量出现显增加 0.4mg /g 组最 0.65g/L比对照提高了 2 3555d 同样出现降趋势

55d 试验组与对照之间异性不显(P>0.05)

 

 


  / g

 

0

0.2m g

0.4m g

0.8m g

 

 

 

 

50                                          b  b                 a           

a

40                                     a

a                 a      a a